中國藥典2015年版規(guī)定純化水微生物限度檢查:取本品不少于 1ml。美國藥典(USP)歐洲藥典(EP)中都是取10ml混合均勻的水樣。還有人說過濾100ml更適合反映真實(shí)的情況。
過濾的越多越能體現(xiàn)真實(shí)的微生物限度水平,這是基本的共識。但是便于之后的計(jì)數(shù)是我們不得不考慮的內(nèi)容。一般來說在每個平板上形成30~300個菌落屬于有效計(jì)數(shù)范圍。如果過濾體積過大,濾膜上的菌落超過300cfu就會有邊界模糊的現(xiàn)象造成無法準(zhǔn)確計(jì)數(shù)。有些公司的微孔濾膜上會帶有方格,一般為180-200個左右,就是為了方便計(jì)數(shù)。
那我們到底要過濾多少體積呢?最好結(jié)合本公司的純化水的微生物限度值歷史數(shù)據(jù)水平盡量多過。極端的說,如果你公司純化水歷史數(shù)據(jù)都是0,那可以取多少純化水過濾多少。如果從純化水的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)(1ml需氧菌總數(shù)不得過100cfu)來說,過濾3ml比較合適,只要在合格范圍以內(nèi),每膜不超過300cfu方便計(jì)數(shù)。折中的情況,過濾10ml是比較多的選擇,但是如果你公司的純化水歷史數(shù)據(jù)維持在30cfu/ml以上,過濾10ml的話膜上會長出300cfu以上的菌落,就太多了不好計(jì)數(shù)了。
如果取10ml,兩片膜共長1000個菌以下并不定是不合格的。因?yàn)槿∷?0ml,只能每次取5ml, .各用于兩片膜的過濾,每張膜只能培養(yǎng)出細(xì)菌或霉菌,不能同時(shí) 出細(xì)菌和霉菌,所以結(jié)果計(jì)算時(shí)體積只能算5ml, 按5ml計(jì),兩片膜有1000 個,則每1ml有200個了所以應(yīng)判為不合格,.只有在500個以下才能算合格的。
應(yīng)該說05年版藥典的標(biāo)準(zhǔn)比00年更為合理,因?yàn)椴捎?a href="http://cybok.cn/lm1/" target="_self" style="color: rgb(255, 0, 0); text-decoration: underline;">薄膜過濾法,取樣量可以加大(平板法時(shí)取1ml),更態(tài)培養(yǎng)微生物,對于檢驗(yàn)更有代表性。二般不可能平板計(jì)數(shù)法不合格,而采用過濾法確熊合格,取樣曩加太卮境養(yǎng)出微生物的機(jī)率更大e若相反要竟一下愿因:是不是檢測有問題。
采用薄膜過濾法可以通過驗(yàn)證來確定取樣量,也并不一 定取5-10ml,若純化水中含微生物量較少,則取樣量可加大,但不能培養(yǎng)出太多菌落導(dǎo)致無法點(diǎn)計(jì),影響計(jì)數(shù)結(jié)果。若含微生物較多,則取用量可減少,總之,在不影響計(jì)數(shù)的前提下,盡可能加大取樣量。另采用薄膜過濾法可以不必加無菌水稀釋,直接濾過即可。
再多說一句,為了取樣有代表性,國外藥典中要求的混合均勻是好的操作。