薄膜過濾法在內(nèi)鏡清洗消毒效果監(jiān)測中是一種重要且有效的微生物檢測手段,其應(yīng)用過程及要點(diǎn)如下:
一、原理
薄膜過濾法是利用微孔濾膜攔截水樣中的微生物,將微生物截留在濾膜上,再將濾膜置于適宜的培養(yǎng)基上培養(yǎng),通過計數(shù)生長的菌落數(shù)來評估水樣中微生物的含量,進(jìn)而判斷內(nèi)鏡清洗消毒的效果。如果清洗消毒徹底,水樣中的微生物數(shù)量應(yīng)極少或沒有;若微生物數(shù)量超標(biāo),則說明清洗消毒可能存在問題。
二、應(yīng)用步驟
采樣準(zhǔn)備
準(zhǔn)備好無菌的采樣瓶、微孔濾膜(一般孔徑為 0.45μm)、過濾裝置、無菌鑷子、培養(yǎng)基等。
確保所有器具都經(jīng)過嚴(yán)格滅菌處理,以避免外界微生物污染影響檢測結(jié)果。
采樣
在內(nèi)鏡清洗消毒后,使用無菌采樣瓶從內(nèi)鏡的各腔道或沖洗用水中采集一定量的水樣。例如,對于胃鏡,可從其活檢通道、吸引通道等分別采集水樣,以保證全面評估內(nèi)鏡的清洗消毒效果。
采樣量應(yīng)根據(jù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和實際情況確定,一般不少于 100mL。
過濾
將微孔濾膜安裝在內(nèi)鏡微生物檢測儀過濾裝置上,確保濾膜與過濾裝置之間密封良好,防止水樣泄漏。
將采集的水樣緩慢倒入過濾裝置中,開啟真空泵或利用其他壓力源,使水樣通過濾膜,微生物則被截留在濾膜上。
過濾完成后,用少量無菌水沖洗過濾裝置,以去除濾膜上可能殘留的非微生物物質(zhì),但要注意沖洗水量不宜過多,以免沖走濾膜上的微生物。
培養(yǎng)
用無菌鑷子小心地將濾膜從過濾裝置上取下,平放在預(yù)先準(zhǔn)備好的適宜培養(yǎng)基上。培養(yǎng)基的選擇應(yīng)根據(jù)可能存在的微生物種類來確定,例如,對于一般細(xì)菌檢測,可使用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基;若要檢測特定致病菌,如結(jié)核分枝桿菌,則需使用相應(yīng)的選擇性培養(yǎng)基。
將含有濾膜的培養(yǎng)基置于適宜的溫度和環(huán)境下培養(yǎng),一般細(xì)菌培養(yǎng)溫度為 35 - 37℃,培養(yǎng)時間為 24 - 48 小時;某些特殊微生物可能需要更長時間的培養(yǎng)。
計數(shù)與結(jié)果判定
培養(yǎng)結(jié)束后,觀察培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)。使用計數(shù)器或肉眼直接計數(shù)濾膜上的菌落,記錄每個濾膜上的菌落數(shù)量。
根據(jù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)定,判定內(nèi)鏡清洗消毒效果是否合格。例如,若規(guī)定每 100mL 水樣中細(xì)菌總數(shù)不得超過一定數(shù)值(如 20CFU),當(dāng)檢測結(jié)果超過該數(shù)值時,則判定內(nèi)鏡清洗消毒不合格,需要重新進(jìn)行清洗消毒處理,并查找原因,采取改進(jìn)措施。
三、優(yōu)點(diǎn)
靈敏度高:能夠檢測出水樣中含量極低的微生物,對于評估內(nèi)鏡清洗消毒效果具有較高的準(zhǔn)確性。即使內(nèi)鏡清洗消毒后殘留的微生物數(shù)量很少,也可能通過薄膜過濾法被檢測出來。
操作相對簡便:與其他一些復(fù)雜的微生物檢測方法相比,薄膜過濾法的操作步驟相對較為簡單,易于在醫(yī)療機(jī)構(gòu)等場所開展。
可同時檢測多種微生物:通過選擇合適的培養(yǎng)基,可以在一次檢測中同時檢測出多種不同類型的微生物,全面評估內(nèi)鏡清洗消毒后的微生物污染情況。
四、注意事項
無菌操作:在整個采樣、過濾、培養(yǎng)等過程中,必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作原則,防止外界微生物污染水樣和濾膜,影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
濾膜質(zhì)量:選擇質(zhì)量合格的微孔濾膜,確保其孔徑均勻、無破損,以保證過濾效果和微生物的截留率。
培養(yǎng)條件控制:嚴(yán)格按照不同微生物的生長要求控制培養(yǎng)溫度、濕度、氣體環(huán)境等條件,確保微生物能夠正常生長繁殖,以便準(zhǔn)確計數(shù)。
重復(fù)檢測:為了減少檢測誤差,提高結(jié)果的可靠性,建議對同一水樣進(jìn)行多次重復(fù)檢測,取平均值作為最終結(jié)果。